미생물 오염 부정시험

미생물 오염 부정시험은 시험 sample 내에 박테리아나 진균류가 오염되어 있는지를 확인하는 시험 방법입니다. 이 시험은 무균성을 요구하는 제품(예: 의약품, 백신, 주사제 등)에 대해 실시되며, 제품의 안전성과 품질을 보장하는 중요한 과정입니다.

FDA 21 CFR 610.12(Sterility Test)는 이러한 시험을 수행하는 기준을 제시하며, 미생물 오염이 없는지 확인하기 위해 엄격한 시험 절차를 따릅니다.

 

1. 시험 방법 설정 근거 및 참고 자료

미생물 오염 부정시험 방법은 다양한 국제 규격을 참고하여 수행됩니다. 주요 근거 문서는 다음과 같습니다.

• FDA 21 CFR 610.12 (Sterility Test)
• 미국약전(USP) <71> Sterility Test
• 유럽약전(EP) 2.6.1 Sterility
• 일본약전(JP) 무균시험법
• 국제표준 ISO 11737-2 (멸균 제품의 미생물 검사)
• 식품의약품안전처(MFDS) 가이드라인

이러한 문서들은 시험 절차, 배양 배지, 배양 조건 및 결과 판정 방법을 상세히 규정하고 있습니다.

 

2. 시험 샘플 및 샘플량

시험 샘플은 제품의 특성과 시험 목적에 따라 다르게 설정됩니다. 일반적인 샘플량 기준은 다음과 같습니다.

• 주사제 및 액체 제형: 10~20mL
• 고형제(정제, 캡슐 등): 2~10개
• 의료기기(주사기, 카테터 등): 개별 제품 단위
• 백신 및 생물학적 제제: 10개 이상

샘플은 무균적으로 취급해야 하며, 시험 중 교차 오염을 방지하기 위한 무균 조작이 필수적입니다.

 

3. 시험법 (FDA 21 CFR 610.12 기준)

FDA 21 CFR 610.12(Sterility Test)는 무균 시험 방법으로 다음 두 가지 방식을 규정하고 있습니다.

3.1 멤브레인 여과법 (Membrane Filtration Method)

이 방법은 액체 샘플을 멤브레인 필터(0.45µm 또는 0.22µm)를 사용하여 여과한 후, 적절한 배지에 배양하여 미생물의 성장을 확인하는 방식입니다. 일반적으로 대용량 시료를 시험할 때 사용됩니다.

절차:

1. 시험 샘플을 멤브레인 필터로 여과
2. 여과한 필터를 두 종류의 배지(FTM, SCDM)에 각각 옮김
3. 배양 후 미생물 성장 여부 확인

배양 조건:

• FTM (Fluid Thioglycollate Medium): 30~35℃에서 14일간 배양 (혐기성 및 호기성 균 검출)
• SCDM (Soybean Casein Digest Medium, TSB): 20~25℃에서 14일간 배양 (진균 및 호기성 균 검출)

3.2 직접 접종법 (Direct Inoculation Method)

이 방법은 시험 샘플을 직접 배지에 접종하여 배양하는 방식으로, 고형 샘플이나 용해가 어려운 제품에 적합합니다.

절차:

1. 시험 샘플을 두 종류의 배지(FTM, SCDM)에 직접 접종
2. 배양 후 미생물 성장 여부 확인

 

4. 배지 및 시험 균주

4.1 배지 종류

• Fluid Thioglycollate Medium (FTM): 혐기성 및 일부 호기성 세균 검출
• Soybean Casein Digest Medium (SCDM, TSB): 진균 및 호기성 세균 검출

4.2 배지 성능 검사

배지의 성능을 확인하기 위해 양성 균주를 접종하여 성장 여부를 평가합니다. 사용되는 대표적인 균주는 다음과 같습니다.

• 대장균(Escherichia coli, ATCC 8739)
• 황색포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538)
• 살모넬라(Salmonella enterica, ATCC 14028)
• 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 9027)
• 칸디다(Candida albicans, ATCC 10231)
• 바실러스(Bacillus subtilis, ATCC 6633)

 

5. 시험 결과 판정

시험 결과는 미생물 성장 여부를 기준으로 판정됩니다.

• 적합 (Pass): 배양 후 미생물 성장이 없음
• 부적합 (Fail): 배양 후 미생물 성장 확인됨
• 재시험 필요: 시험 과정 중 오염 가능성이 있거나, 모호한 결과가 나온 경우

모든 시험 결과는 상세하게 기록되며, 필요한 경우 추가적인 분석이 진행될 수 있습니다.

FDA 21 CFR 610.12(Sterility Test)에 기반한 미생물 오염 부정시험 방법은 의약품 및 멸균 제품의 안전성을 평가하는 필수적인 절차입니다. 멤브레인 여과법과 직접 접종법을 활용하여 제품 내 박테리아 및 진균 오염 여부를 철저하게 검증해야 합니다. 시험 결과의 정확성을 유지하기 위해 철저한 무균 조작과 배지 성능 검사가 필수적이며, 신뢰할 수 있는 품질 관리를 통해 안전한 제품을 공급하는 것이 중요합니다.